Исследовательская работа "Изучение эффективности биопрепарата на зерновых культурах"

Муниципальное общеобразовательное учреждение

«средняя общеобразовательная школа № 11»

Исследовательская работа

Изучение эффективности биопрепарата на зерновых культурах

Выполнил: ученик 10 «А» класса

Пронин Александр

Руководитель: учитель биологии

Нормайкина И.Н.

Научный консультант: канд. с.-х. наук

доцент кафедры ботаники и физиологии растений

МГУ им. Н.П. Огарева Колмыкова Т.С.

САРАНСК

2011

Бактерии рода Pseudomonas относятся к числу наиболее перспективных материалов для создания ростостимулирующих и защитных препаратов для сельскохозяйственных растений, так как среди представителей этой группы микроорганизмов встречаются не только антагонисты почвенных фитопатогенов [1], но и многие штаммы Pseudomonas активно способствуют улучшению роста и развития растений [2].

На сегодняшний день рынок производимых препаратов в основном представлен биопрепаратами для животноводства, биопрепаратами инсектицидного действия, а также биопрепаратами для обработки семян бобовых культур и биопрепаратами удобрительного действия. Остается пока достаточно свободным сегмент рынка по биопрепаратам для зерновых овощных и технических культур, которые занимают значительно большие посевные площади, чем бобовые культуры. Также остается открытым вопрос о способах и практических рекомендациях применения биопрепаратов.

В связи с выше изложенным целью работы стало изучение ростстимулирующего действия биопрепарата на основе культуральной жидкости Pseudomonas aureofaciens штамм 2006  на вегетирующих растениях ячменя и яровой пшеницы

Задачи исследования:

1. Определить ростовые параметры надземных органов изучаемых растений после предпосевной обработки семян биопрепаратом;
2. Определить ростовые параметры подземных органов  изучаемых растений после предпосевной обработки семян биопрепаратом;
3. Определить продуктивность изучаемых зерновых культур после использования биопрепарата.

1 Обзор литературы

1.1 Биологические препараты бактериального происхождения и их классификация

Эффективность биопрепаратов в растениеводстве и складывающаяся тенденция на мировом и внутреннем рынках показывают, что в ближайшие 10-15 лет их использование в сельском хозяйстве будет значительно увеличиваться. Ярким примером тому может служить факт сокращения производства и применения многих химических средств сельскохозяйственного назначения в высокоразвитых странах. За последнее время во всем мире, в том числе и в России неизмеримо вырос интерес к проблемам микробиологии в сельском хозяйстве. Удалось значительно расширить и углубить наши представления о роли микроорганизмов в жизни растений и сформулировать приоритетные практические задачи по сокращению объемов применения азотных и фосфорных удобрений при выращивании растений, замене пестицидов на микробиологические препараты, защите растений от стресса, в том числе и создаваемого загрязнением почв тяжелыми металлами и радионуклидами [3].

Такие технологии преимущественно основаны на использовании микробиологических препаратов (МБП), представляющих из себя живые клетки отселектированных по полезным свойствам микроорганизмов, которые находятся или в культуральной жидкости, или адсорбированы на нейтральном носителе. Такой препарат позволяет создать огромную концентрацию полезных форм микроорганизмов (в 1 миллилитре или грамме препарата содержится до 1-5 млрд. клеток бактерий) в нужном месте и в нужное время. За счет этого внесенные формы могут успешно конкурировать с аборигенной микрофлорой и захватывать экологические ниши, предоставляемые им растением. Ведущими функциональными видами МБП для земледелия являются микробиологические удобрения, фунгициды, стимуляторы роста, ризобиальные инокулянты для бобовых культур (биоинсектициды и родентициды в данной статье не рассматриваются).

Все иные препараты, содержащие полезные для растений продукты метаболизма (антибиотики, витамины, стимуляторы роста и др.), выработанные микроорганизмами, а также и сами отмершие клетки микроорганизмов правильнее называть веществами микробиологической природы.

На сегодня, следуя сведениям, изложенным в Справочном издании «Списка пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории РФ, 2008 г.» и «Дополнениям к Государственному каталогу…2008 г.» к препаратам микробиологической природы, т.е содержащих микроорганизмы и/или продукты их метаболизма могут быть отнесены:

- фунгициды (Бисолби-Сан, Фитоспорин-М, Бинорам, Елена, Планриз, Псевдобактерин-2, Алирин-Б, Баксис, Бактофит, Бактрил, Гамаир, Агат-25, Вермикулен, Глиокладин, Триходермин нова, Фитолавин);

- регуляторы роста растений (Агат – 25, Бинорам, Эмистим);

- микробиологические удобрения (Экстрасол, Бактофосфин, Бисолби, БисолбиФит, Агрика, Азофит, Байкал М-1, Восток М-1, Ресойлинг, Ризоагрин, Ургаса, Фосфатовит, Экофит ) [4].

1.2 Биопрепараты на основе бактерий рода Pseudomonas.

Бактерии рода Pseudomonas являются потенциальными объектами агробиотехнологии для разработки на их основе биопрепаратов, стимулирующих рост и повышающих продуктивность растений. Псевдомонады, в первую очередь флуоресцирующие, синтезируют целый ряд соединений, стимулирующих рост растений; они представлены фитогормонами, такими как ауксины и цитокинины. Культура Pseudomonas aureofaciens ИБ 6 из Коллекции микроорганизмов Института биологии УНЦ РАН является объектом биологического контроля почвенных фитопатогенов и обладает совокупностью полезных для растений свойств, таких как синтез антифунгальных антибиотиков и ростстимулирующих веществ [5].

Название семейства происходит от двух греческих корней: "псевдо" сходный и "монас" название группы простейших (животных) с полярно расположенными жгутиками. Поэтому к псевдомонадам относят как палочковидные бактерии с полярно расположенным жгутиком, так и слабоизогнутые палочки, физиологически крайне специализированные автотрофные хемосинтезирующие бактерии (Hydrogenomonas, Nitrosomonas, Thiobacillus) и обычные гетеротрофные бактерии (Pseudomonas), т. е. смешиваются представители питания автотрофного и гетеротрофного. Следовательно, в семейство Pseudomonadaceae входят грамотрицательные палочки, растущие в аэробных условиях или получающие энергию за счет анаэробного дыхания либо за счет связанного кислорода (денитрификация), но не брожения. Псевдомонады используют широкий спектр органических веществ, в том числе циклических соединений (гетероциклических и ароматических). Благодаря "всеядности" псевдомонады распространены повсеместно: в воде, почве, илах, переносятся с током воздуха. Многие из них образуют водорастворимые и флюоресцирующие пигменты [6].

Клетки псевдомонад представляют собой мелкие одиночные грамотрицательные палочки. Спор и выростов не образуют, подвижны, имеют полярно расположенные жгутики. Число жгутиков у разных видов колеблется. Клетки в культурах часто объединяются в небольшие комочки или зерна, окруженные толстой слизистой оболочкой, иногда резко очерченной, зооглеи. К настоящему времени накопилось достаточно сведений, чтобы использовать некоторые биохимические признаки для таксономической характеристики рода. Так, например, химический состав клеточной стенки бактерий постоянен и, как правило, не изменяется на различных стадиях развития культуры или при возникновении мутаций. У бактерий рода Pseudomonas процент гуанин + цитозин в ДНК колеблется в пределах 58-69%.  

Колонии бактерий очень разнообразны: слизистые и пастообразные, выпуклые и плоские, крупные и мелкие. У многих видов отмечается внутренняя структура колоний. Если их рассматривать в микроскопе при малом увеличении, то в одних случаях можно обнаружить мелкозернистую колонию; в других ячеистую, напоминающую соты; в третьих колонии в виде мелких комочков или зерен. Большинство видов имеет колонии без внутренней структуры под микроскопом они выглядят как однородная гомогенная масса. Псевдомонады хорошо растут на обычных питательных средах сложных органических [7].

Обстоятельная информация накоплена по многофункциональному микробиопрепарату Агат-25К. Основу препарата Агат-25К составляют вещества биологической природы, главное действующее начало почвенные бактерии Pseudomonas aureofasciens H16, выделенные из естественного микробного сообщества ризосферной почвы [8].

Сфера применения препарата Агат-25К включает зерновые и овощные культуры, подсолнечник, картофель и другие. Агат-25К эффективен против корневых гнилей, комплекса головневых заболеваний, фитофтороза и других грибных и бактериальных болезней. Имеются сведения, что Агат-25К способствует лучшему использованию азота воздуха, повышению качества клейковины, уменьшению содержания радионуклидов и тяжелых металлов в растениях и в урожае, ускорению разложения долгоживущих пестицидов в почве [9].

При использовании в качестве продуцентов некоторых штаммов бактерий Ps. fluorescens осуществляется биосинтез органических кислот: глюконовой, 2-кетоглюконовой, кетоглутаровой и пировиноградной. Для получения аминокислот: глутаминовой, l-аспарагиновой, валина и метионина также используются различные представители бактерий Pseudomonas fluorescens и Ps. aeruginosa. Из окрашенных веществ, синтезируемых бактериями рода Pseudomonas, были выделены химические вещества, обладающие антибиотическими свойствами, пиоцианин, хлорорафин, оксихлорорафин, феназин-1-карбоновая кислота и эругинозин. Все перечисленные пигменты обладают антибиотической активностью против грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей и грибов [10,11].

Таким образом, очевиден факт высокой конкурентной способности биопрепаратов на современном рынке средств защиты растений. Однако, в механизме действия отдельно взятых биологических веществ остается много неясного.

2 Объект, материал и методы исследования

2.1 Объект и материал исследования

Объектами исследования служили растения пшеницы сорта Тулайковская, ячменя сорта Заозерный.

Материалом исследования служила чистая культура бактерий Pseudomonas aureofaciens штамм 2006, селекционированной  на кафедре биотехнологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева [12].

2.2 Методы исследования

Обработка семян кульутральной жидкостью Pseudomonas aureofaciens

Все исследования проводили в полевых условиях на базе  ОПХ «1Мая» октябрьского района.

В качестве предпосевной обработки использовали культуральную жидкость Ps. аureofaciens штамм 2006 со сроком хранения 5 суток (титр 1012 КОЕ/мл). Семена  пшеницы и ячменя обрабатывали кульутральной жидкостью разведенной в 200 раз с добавлением крахмала 0,05% в качестве полисахаридной оболочки путем кратковременного механического перемешивания.

Семена высаживали на экспериментальные площадки. Площадь каждой площадки 0,2 га.  Почва на экспериментальной площадке черноземная (рН почвенной вытяжки 6.5) [13]

Контролем служили растения без предварительной обработки семян. После проведенных каждой из обработок у опытных растений на разных стадиях вегетации определяли высоту побега (от прикорневой зоны до кончика самого длинного листа), площадь листовой поверхности, чистую продуктивность фотосинтеза (ЧПФ), массу и объем корневой системы.

Метод определения чистой продуктивности фотосинтеза растений (ЧПФ). Отбирали 3 растения с каждого варианта. Все зеленые листья отрывали от растений, взвешивали и складывали в бюксы. Затем взвешивали все стебли и складывали в другие бюксы.

 Далее определяли площадь зеленых листьев. Площадь определяли путем умножения значений длины листа на его ширину с введением поправочного коэффициента 0,7. После этого бюксы с растительным материалом ставили в сушильный шкаф и сушили до воздушно-сухого состояния при температуре 105 ºС. Затем растительный материал взвешивали, определяя воздушно-сухую массу зеленых листьев и стеблей. Через 3-4 дня вновь брали такое же количество растений с каждого варианта условий. Ставили в сушильный шкаф, просушивали и взвешивали.

 Чистую продуктивность фотосинтеза рассчитывали по формуле Веста-Бригса:

ЧПФ = B1- B2 / 0,5∙ (S1+S2) ∙ n ;                 (1)

где ЧПФ – чистая продуктивность фотосинтеза, г/м2 в сутки,

B1 и B2 – сухая масса растений в конце и в начале учетного периода, г;

S1 и S2 – площадь зеленных листьев в начале и в конце учетного периода, м2;

n – число дней между двумя определениями [14].

Определение объема корневой системы. Объем корневой системы определяли методом Д.А. Сабинина и И.И. Колосова. Отобранные растения пшеницы укрепляли с помощью ваты в отверстия разрезанной пополам пробки. Обе половинки пробки связывали по окружности ниткой и давали стечь раствору с корней. Последние прилипшие к корням капли жидкости удаляли с помощью влажной фильтровальной бумаги. Отмечали положение  мениска А1 в пипетке объемометра, соответствующее положению воды в цилиндре, и погружали корни в цилиндр так, чтобы пробка с закрепленными в ней растениями лежала на цилиндре. В результате погружения корневой системы в объемометр уровень жидкости в цилиндре повысится и вызовет сдвиг мениска в пипетке до положения В1. После этого корни вынимали из цилиндра, давали стечь воде и, не меняя наклона пипетки, доливали в цилиндр воду, пока мениск в пипетке не займет положение А1. Затем при том же положении пипетки приливали из бюретки в цилиндр такое количество воды, при котором мениск займет положение В1. Прилитый из бюретки объем воды равен объему измеряемых корней. Определение повторяли 2-3 раза и рассчитывали среднюю величину [14].

Для определения массы корневой системы растений исследуемый материал взвешивали на технических весах с точностью до 0,01 г.

Определение веса 1000 зерен и абсолютный вес семян. Для определения веса 1000 зерен берут образец семян, хорошо перемешивают, разравнивают на гладкой поверхности в виде квадрата и делят его линейкой крестообразно на 4 треугольника. Их двух противоположных треугольников без выбора отсчитывают по 250 целых семян и объединяют их. Получают две пробы по 500 семян. Каждую пробу взвешивают на технических весах и суммируют (1000 семян). Определения считаются правильными, если разница в весе между двумя пробами не превышает 3 % среднего арифметического веса их.

Определение рН почвенного раствора. На весах взвешивали 5 грамм почвы и переносили в колбу. В колбу с образцом почвы приливали такое количество 0,1 н раствора соляной кислоты, чтобы соотношение почва : раствор составляло 1:1. В результате этого коллоидная глина выпадает в виде хлопьев. Затем в сосуд добавляли  дистиллированную воду в таком объеме, чтобы соотношение почва раствор составляло 1:2,5. Колбу со смесью закрывали пробкой и энергично встряхивали в течение 5 минут. Полученному раствору давали отстояться до выпадения почвы в осадок. Осторожно сливали надосадочную фракцию и несколько раз фильтруют. Кислотность полученного фильтрата измеряли на рН-метре [15].

Математическая обработка результатов исследования. Полученные результаты сводили в таблицы, при помощи компьютерной программы находили среднее значение, ошибку отклонения и проводили анализ.

3 Результаты и их обсуждение

3.1 Влияние биопрепарата на ростовые параметры растений яровой пшеницы и ячменя

Для определения эффективности биопрепарата мы использовали показатели площади одного листа растения, а также массы и объема корневой системы. Указанные параметры прогнозируют урожай. Указанные параметры прогнозируют урожай зерновых культур и являются необходимым элементом для определения чистой продуктивности фотосинтеза. В таблицах представлены значения ростовых параметров в фазы кущения и выхода в трубку.

Анализируя полученные данные, мы установили, что бактериальный препарат стимулирует развитие площади листа во всех вариантах у обоих видов изучаемых нами растений (таблица 1).

Таблица 1 – влияние биопрепарата на площадь листовой поверхности культурных растений

У растений яровой пшеницы в фазу кущения биопрепарат стимулировал прирост площади листа на 22 % по сравнению с контролем. В фазу выхода трубку увеличение было по сравнению с необработанными растениями на 9 %. У растений ячменя мы наблюдали сходную картину, однако в фазу кущения под действием биопрепарата мы наблюдали более сильную стимуляцию по сравнению с пшеницей. Прирост площади листа в этом варианте составил  29 % по сравнению с контролем. В фазе выхода в трубку биологический препарат стимулировал увеличение площади листвой поверхности у ячменя на 6 %.

Биопрепарат на основе бактерий Pseudomonas aureofaciens также стимулировал рост и развитие корневой системы растений. во всех вариантах без исключения биопрепарат оказал высокое стимулирующее действие (таблица 2), однако несколько в ином виде, чем по площади листа. У растений яровой пшеницы в фазу кущения биопрепарат достоверно увеличивал массу корней на 3 % по сравнению с контролем.

Таблица 2 – Влияние биопрепарата на рост и развитие корневой системы культурных растений

В фазе выхода в трубку биопрепарат оказал более значительное стимулирующее действие – на 7 % по сравнению с контролем.  

В отношении объема корневой системы  мы зафиксировали примерно одинаковое  увеличение данного параметра в разные фазы развития у растений пшеницы. У растений ячменя в фазе кущения в контрольном варианте и в варианте с биопрепаратом  различия были незначительными (в пределах ошибки). Масса и объем корневой системы под влиянием биопрепарата сильно увеличились по сравнению с контролем:  в фазе выхода в трубку – на 13 и 14 % соответственно.

Таким образом, мы отметили, что предпосевная обработка семян яровой пшеницы и ячменя биопрепаратом на ранних этапах развития растений стимулировала прирост площади листовой поверхности. По мере развития  растений в опытных вариантах с применением биопрепарата усиливалось развитие корневой системы растений.

3.2 Действие предпосевной обработки семян биопрепаратом на продуктивность культурных растений

Важнейшим этапом в прогнозировании урожая явление анализ чистой продуктивности фотосинтеза, которую определяли по приросту  сухой массы и площади зеленых листьев с использованием формулы Веста-Бригса (1). Данные, представленные в таблицы получены нами 8.07.11 и 21.07.11.

Увеличивая ростовые показатели растений, биопрепарат стимулировал физиологические параметры изучаемых нами растений. у яровой пшеницы биопрепарат увеличивал значения чистой продуктивности фотосинтеза на 3 % (08.07) и на 4,5 % (21.07) по сравнению с контролем (таблица 3).

Далее мы определили биологический урожай по массе 1000 семян, как среднее из трех проб семян нового урожая. Биопрепарат на основе бактерий Pseudomonas aureofaciens увеличивал значение массы 1000 семян по сравнению с контрольным вариантом на 11 % у ячменя и на 7 % - у яровой пшеницы (таблица 4).

Таблица 3 – Чистая продуктивность фотосинтеза культурных растений  при использовании биопрепарата, г/см3 растение

Таблица 4 – Биологический урожай культурных растений при действии биопрепарата, г 1000 семян

Таким образом мы установили, что предпосевная обработка семян биопрепаратом на основе бактерий Pseudomonas aureofaciens не только стимулировала рост надземных и подземных органов растений ячменя и яровой пшеницы, но и стимулировал накопление биомассы растений, что и привело к повышению продуктивности зерновых культур.

Выводы

1. Предпосевная обработка семян яровой пшеницы и ячменя биопрепаратом Pseudomonas aureofaciens в фазу кущения в более сильной степени стимулировала прирост площади листовой поверхности растений.

2. На стадии выхода в трубку биопрепарат усиливал рост и развитие корневой системы растений яровой пшеницы и ячменя.

3. Предпосевная обработка семян биопрепаратом на основе бактерий Pseudomonas aureofaciens  увеличивала чистую продуктивность фотосинтеза и биологический урожай растений яровой пшеницы и ячменя.

Список использованных источников

1 Максимова Н.П., Лысак В.В., Игнатович В.В. и др. Пат.2051586 Российская Федерация 6 А01 N 63/00. С 12 N1/20// C 12 N 1/20, C 12 R 1:40. Штамм бактерий Pseudomonas putida – биостимулятор роста растений. Заявлено 12.07.91 Опубликовано 10.01.1996. иол.1.

2 Свешникова Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas – антагонисты фитопатогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике. Автореферат дис. … канд. Биол.наук. Уфа: институт биологии УНЦ РАН, 2003. 24 с.

3 Тихонович И.А., Кожемяков А.П., Чеботарь В.К. и др. Биопрепараты в сельском хозяйстве (Методология и практика применения микроорганизмов в растениеводстве и кормопроизводстве). – М.: Россельхозакадемия, 2005. – 154 с.

4 Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации М.: Изд-во Агрорус, 2008. 559 с.

5 Свешникова Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas – антагонисты фитопатогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике: автореферат дис. … канд. биол. Наук / Е.В. Свешникова. – Уфа, 2003. – 24 с.

6 Головин  П.Н. Фитопатология / П.Н. Головин,  З.И. Шестиперова, М.В. Арсеньева [и др.]. – Л. : ЛГУ, 1980. – 240 с.

7 Смирнов В.В. Бактерии рода Pseudomonas / В.В.Смирнов, Е.А.Киприанова. – Киев : Наукова Думка, 1990. – С. 84-111.

8 Мордухова Е.А. Синтез индолил-3-уксусной кислоты ризосферными псевдомонадами: Влияние плазмид биодеградации нафталина / Е.А.Мордухова, В.В. Кочетков, Ф.Я. Поликарпова [и др.] // Прикл. биохимия и микробиология. – 1998. – Т. 34, № 3. – С. 287-292.

9  Стрелков Е.В. Композиции на основе Агата-25 К против корневых гнилей и твёрдой головни озимой пшеницы / Е.В. Стрелков, И.И. Бегунов, В.Т.Гончаров [и др.] // Защита и карантин растений. – 2002. – №2. – С. 34-37. 

10 Довгаленко В.Н. Эффективность смесей на основе Агата-25К против болезней озимой пшеницы / В.Н.  Довгаленко // Защита и карантин растений. – 2002. – № 4. – С. 25-28.

11 Ермолаева Н.И. Применение биометода в открытом и защищенном грунте: использование ризосферных бактерий рода Pseudomonas для предпосевной обработки огурцов, капусты и картофеля / Н.И. Ермолаева, Н.И. Иванова, Н.П. Скворцова [и др.] // Защита растений. – 1992. – № 8. – С.24-25.

12 Лукаткин А.А. Оптимизация условий культивирования бактерий Pseudomonas aureofasiens на послеспиртовой барде / А.А. Лукаткин, С.А.Ибрагимова, В.В. Ревин // Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине. – М., 2007. – С.144-145.

13 Доспехов Б.А.  Методика  полевого  опыта  (с  основами  статистической   обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов.  –  М.: Высшая школа, 1985. – 126 с.

14  Викторов Д.П. Практикум по физиологии растений / Д.П. Викторов. – Воронеж : ВГУ, 1991. – 157 с.

15 Ващенко И.М. Практикум по основам сельского хозяйства / И.М.Ващенко, К.П. Ланге, Меркулов М.П. – М. : Просвещение, 1982. – 108 с.

Изучение эффективности биопрепарата на зерновых культурах

МОУ «Средняя общеобразовательная школа» № 11, г. 430024 Саранск,

бул. Эрьзи, д. 28 а

Автор: ученик 10 класса Пронин Александр

Руководитель: учитель биологии и химии Нормайкина И.Н.

Цель работы - изучение ростстимулирующего действия биопрепарата на основе культуральной жидкости Pseudomonas aureofaciens штамм 2006  на вегетирующих растениях ячменя и яровой пшеницы

Задачи исследования:

1. Определить ростовые параметры надземных органов изучаемых растений после предпосевной обработки семян биопрепаратом;
2. Определить ростовые параметры подземных органов  изучаемых растений после предпосевной обработки семян биопрепаратом;
3. Определить продуктивность изучаемых зерновых культур после использования биопрепарата.

Объектами исследования служили растения пшеницы сорта Тулайковская, ячменя сорта Заозерный.

Материалом исследования служила чистая культура бактерий Pseudomonas aureofaciens штамм 2006, селекционированной  на кафедре биотехнологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

В работе использовали вегетационный полевой опыт, лабораторные методы определения чистой продуктивности фотосинтеза, объема корневой системы, биологического урожая.

В ходе исследования установили, что предпосевная обработка семян яровой пшеницы и ячменя биопрепаратом Pseudomonas aureofaciens в фазу кущения в более сильной степени стимулировала прирост площади листовой поверхности растений. На стадии выхода в трубку биопрепарат усиливал рост и развитие корневой системы растений яровой пшеницы и ячменя. Предпосевная обработка семян биопрепаратом на основе бактерий Pseudomonas aureofaciens  увеличивала чистую продуктивность фотосинтеза и биологический урожай растений яровой пшеницы и ячменя.

Список использованных источников: 1 Максимова Н.П., Лысак В.В., Игнатович В.В. и др. Пат.2051586 Российская Федерация 6 А01 N 63/00. С 12 N1/20// C 12 N 1/20, C 12 R 1:40. Штамм бактерий Pseudomonas putida – биостимулятор роста растений. Заявлено 12.07.91 Опубликовано 10.01.1996. иол.1.; 2 Свешникова Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas – антагонисты фитопатогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике. Автореферат дис. … канд. Биол.наук. Уфа: институт биологии УНЦ РАН, 2003. 24 с.; 3 Тихонович И.А., Кожемяков А.П., Чеботарь В.К. и др. Биопрепараты в сельском хозяйстве (Методология и практика применения микроорганизмов в растениеводстве и кормопроизводстве). – М.: Россельхозакадемия, 2005. – 154 с.; 4 Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации М.: Изд-во Агрорус, 2008. 559 с.; 5 Свешникова Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas – антагонисты фитопатогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике: автореферат дис. … канд. биол. Наук / Е.В. Свешникова. – Уфа, 2003. – 24 с.; 6 Головин  П.Н. Фитопатология / П.Н. Головин,  З.И. Шестиперова, М.В. Арсеньева [и др.]. – Л. : ЛГУ, 1980. – 240 с.; 7 Смирнов В.В. Бактерии рода Pseudomonas / В.В.Смирнов, Е.А.Киприанова. – Киев : Наукова Думка, 1990. – С. 84-111.; 8 Мордухова Е.А. Синтез индолил-3-уксусной кислоты ризосферными псевдомонадами: Влияние плазмид биодеградации нафталина / Е.А.Мордухова, В.В. Кочетков, Ф.Я. Поликарпова [и др.] // Прикл. биохимия и микробиология. – 1998. – Т. 34, № 3. – С. 287-292.; 9  Стрелков Е.В. Композиции на основе Агата-25 К против корневых гнилей и твёрдой головни озимой пшеницы / Е.В. Стрелков, И.И. Бегунов, В.Т.Гончаров [и др.] // Защита и карантин растений. – 2002. – №2. – С. 34-37.; 10 Довгаленко В.Н. Эффективность смесей на основе Агата-25К против болезней озимой пшеницы / В.Н.  Довгаленко // Защита и карантин растений. – 2002. – № 4. – С. 25-28.; 11 Ермолаева Н.И. Применение биометода в открытом и защищенном грунте: использование ризосферных бактерий рода Pseudomonas для предпосевной обработки огурцов, капусты и картофеля / Н.И. Ермолаева, Н.И. Иванова, Н.П. Скворцова [и др.] // Защита растений. – 1992. – № 8. – С.24-25. ; 12 Лукаткин А.А. Оптимизация условий культивирования бактерий Pseudomonas aureofasiens на послеспиртовой барде / А.А. Лукаткин, С.А.Ибрагимова, В.В. Ревин // Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине. – М., 2007. – С.144-145.; 13 Доспехов Б.А.  Методика  полевого  опыта  (с  основами  статистической   обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов.  –  М.: Высшая школа, 1985. – 126 с.; 14  Викторов Д.П. Практикум по физиологии растений / Д.П. Викторов. – Воронеж : ВГУ, 1991. – 157 с.; 15 Ващенко И.М. Практикум по основам сельского хозяйства / И.М.Ващенко, К.П. Ланге, Меркулов М.П. – М. : Просвещение, 1982. – 108 с.