МУНИЦИПАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

«Седельниковская средняя общеобразовательная школа № 2»

Муниципального района Омской области

ВЫРАЩИВАНИЕ

И МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ  ИЗУЧЕНИЕ ПЛЕСНЕВЫХ  ГРИБОВ

Выполнила работу ученица 10 класса

Грицина Юлия

Руководитель: учитель биологии

Мутовкина Эрна Эйнардовна

с. Седельниково, 2010 год

Оглавление

ВВЕДЕНИЕ        

ОБОРУДОВАНИЕ        

НЕОБХОДИМЫЕ  РЕАКТИВЫ        

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ С ЭЗОИН-МЕТИЛЕНОВЫМ ГОЛУБЫМ СУХИМ        

ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБА ИЗ ВОЗДУХА        

ПРИГОТОВЛЕНИЕ  ПОСТОЯННЫХ ПРЕПАРАТОВ  ГРИБОВ ДЛЯ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ        

ЛИТЕРАТУРА        

Приложение        

Цель работы: выращивание микроскопических грибов, изготовление постоянных микропрепаратов, которые могут быть использованы для демонстрации

ВВЕДЕНИЕ

Грибы – обширная группа организмов, занимающая особое положение в системе органического мира и насчитывающая около 100 тысяч видов Значительная часть их представлена плесневыми микроскопическими грибами. Это интереснейшие объекты для изучения, однако в школах учащиеся знакомятся лишь с некоторыми из них и, как правило, по таблицам и тексту учебника. Школьной программой предусмотрено изучение под микроскопом только плесневого гриба мукора, препарат которого изготавливается методом раздавленной капли (мицелий гриба переносится препаровальной иглой на предметное стекло) и имеет ряд недостатков:  он не может долго храниться,  в нем наблюдается грубое нарушение структуры гриба и его естественного вида. В то же время в научной практике давно известны и хорошо себя зарекомендовали вполне простые методы изготовления постоянных микропрепаратов, которые с успехом могут быть использованы учителями биологии для демонстрации различных видов микроскопических грибов. В обобщенном и  переработанном виде методика изготовления таких препаратов описывается ниже.

ОБОРУДОВАНИЕ

1. Две – три чашки Петри (их можно заменить выпаривательными фарфоровыми чашками, накрытыми обычным стеклом)
2. Предметные и покровные стекла.
3. Микробиологическая петля. (е легко изготовить самим из новой спирали для электроплитки. Кусочек спирали изгибают в виде петельки правильного круга диаметром 3 – 5мм, которую затем вплавляют в стеклянную трубочку)
4. Спиртовка

НЕОБХОДИМЫЕ  РЕАКТИВЫ

1. Панкреатический гидролизат рыбной муки
2. Экстракт пекарных дрожжей
3. Лактоза
4. Натрий фосфорнокислый двузамещенный
5. Натрий хлористый
6. Эозин-Н
7. Метиленовый голубой
8. Агар

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ С ЭЗОИН-МЕТИЛЕНОВЫМ ГОЛУБЫМ СУХИМ

364г. среды тщательно размешать в 1 л. дистиллированной воды, кипятить в течение 2-3 мин. до полного расплавления агара, фильтровать через ватно-марлевый фильтр и автоклавировать при температуре 112оС в течение 20 мин. Стерильную среду охладить до температуры 45-50оС, разлить в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм, после застаивания подсушить при температуре (37±1)ОС в течение 40-60 мин.

ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБА ИЗ ВОЗДУХА

Как известно, в воздухе находится множество спор самых разных грибов, которые, попав в благоприятные условия, прорастают. Для выделения грибов из воздуха чашку Петри с застывшей питательной средой открывают и оставляют в таком виде на 20 минут. Затем закрывают и ставят в теплое место. Через 3 – 4 дня на поверхности питательной среды вырастают колонии грибов, споры которых были в воздухе. Чем больше спор в воздухе, тем больше колоний образуется в чашке. Чаще всего встречаются пенициллин (колонии сине-зеленого цвета), мукор (белая плесень с головчатыми спорангиями), ризопус (хорошо заметные черные головки на бесцветных нитях мицелия).

 Для выделения гриба в чистом виде поступают так: микробиологическую петлю прокаливают в пламени горелки, касаются поверхности какой-либо одной выросшей колонии так, чтобы захватить споры этого гриба, и сразу этой петлей проводят по поверхности свежей застывшей питательной среды. Через три-четыре дня при условии соблюдения чистоты эксперимента в этой чашке вырастут колонии данного гриба.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ  ПОСТОЯННЫХ ПРЕПАРАТОВ  ГРИБОВ ДЛЯ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ

1. Готовят небольшое количество агаризованной питательной среды.
2. Питательную среду тонким слоем наливают на поверхность предметного стекла и дают застыть
3. Микробиологической петлей проводят по поверхности культуры гриба в чашке Петри, а затем по поверхности предметного стекла.
4. Предметное стекло ставят в стакан, на дне которого налита дистиллированная вода. Края стакана смазывают вазелином и сверху закрывают стеклом.
5. Через два-три дня на стекле разовьется мицелий гриба. Стекло вынимают. На поверхность питательной среды, содержащей мицелий гриба, пипеткой наносят смесь 96% спирта с 70% уксусной кислотой (2:3), следя за тем, чтобы жидкость полностью покрывала мицелий гриба и не оставалось пузырьков воздуха. После этого стекло выдерживают 20 минут на воздухе.
6. Затем стекло на 10 минут опускают в другой стакан с дистиллированной водой.
7. Стекло с мицелием гриба переносят в стакан с раствором генцианвиолета (чернила «Радуга») и оставляют в растворе красителя на сутки.
8. Через сутки стекло подсушивают, снимая раствор красителя фильтровальной бумагой, переносят на 10 минут в стакан с водой, после чего опять подсушивают и изучают под микроскопом. Как правило, под микроскопом отчетливо бывают видны строения мицелия, спорангии или конидии.
9. При рассмотрении микропрепарата выбирают наиболее удачный его участок размером с покровное стекло, а остальную часть удаляют.
10. Оставшийся участок препарата заливают несколькими каплями расплавленного глицерин-желатина и накрывают покровным стеклом. Избыток глицерин-желатина, выступающего за края покровного стекла, удаляют бритвой. Стекло по краям окантовывают клеем БФ-2. Глицерин-желатин готовят следующим образом: 7гр чистого пищевого желатина размачивают в течение 2-3 часов в 42мл воды, добавляют 50мл глицерина и 0,5г фенола. Смесь нагревают при помешивании на водяной бане, после чего фильтруют через сложенную втрое марлю и охлаждают. Застывший глицерин-желатин может храниться достаточно долго. При необходимости берут часть застывшего глицерин-желатина, разогревают и используют. Приготовленные вышеописанным способом микропрепараты хранятся без изменений очень долго и могут широко использоваться на уроках

ЛИТЕРАТУРА

1. Пономарева И.Н., Корнилова О.А., Кучменко В.С.  Биология. Растения. Бактерии. Грибы. Лишайники. Учебник для 6 класса. М.Вентана – Граф, 1999
2. Наумов Н.А.  Метод миклогических и фитопатологических исследований.  М, Литература 1937
3. Жизнь растений.

Приложение