УМК

ГБОУ СПО СК «Пятигорский медицинский колледж»

УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ

КОМПЛЕКС

 «УСТРОЙСТВО БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ПОВЕДЕНИЯ В ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ЗАБОРА И ДОСТАВКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА В ЛАБОРАТОРИЮ. ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ».

ДИСЦИПЛИНА: «Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии»

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ: «Лечебное дело», «Сестринское дело».

Составила преподаватель: Аношко Е.В.

ТЕМА: «УСТРОЙСТВО БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ПОВЕДЕНИЯ В ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ЗАБОРА И ДОСТАВКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА В ЛАБОРАТОРИЮ. ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ».

МОТИВАЦИЯ ТЕМЫ

Накануне практического занятия каждый студент  прослушал лекционный материал, получил методические указания для изучения темы и подготовки к данному занятию. На занятии разбираются вопросы организации микробиологической лаборатории и правила поведения в ней, изучаются микроскопические методы исследования – основа для постановки первичного диагноза. Это занятие позволит освоить будущим медицинским работникам манипуляции приготовления бактериологического препарата и окраски его дифференциально-диагностическим методом по Граму, а демонстративная микроскопия готовых препаратов различных форм бактерий поможет сформулировать целостное представление о мире микробов.

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ

Учебные:

- показать студентам, как  работать с живыми культурами микроорганизмов, соблюдая технику безопасности и правила асептики;

- продемонстрировать технику приготовления бактериологического препарата и его окрашивание по методу Грама;

- научить микроскопировать препараты с помощью иммерсионной системы микроскопа.

Воспитательные:

- воспитывать общеучебные навыки: внимания и аккуратности;

- формировать чувство ответственности при выполнении манипуляций;

- формировать качества личности, такие как трудолюбие, самостоятельность.

СХЕМА ИНТЕГРАТИВНЫХ СВЯЗЕЙ

ИСТОКИ                                      ТЕМА                                       ВЫХОД

Основы сестринского                                                            История медицины:

дела: «Инфекционный                                                           «Медико-биологи-

процесс» теория                                                                      ческие направления

в  медицине   нового

                                                                                                времени»

Манипуляционная                 «Микробиологические         Анатомия: «Инфек-

техника: «СПЭР                       методы исследования»       ционные болезни»

подразделений»

практика

Фармакология                                                                         С/д в хирургии:

«Антибиотики»                                                                       «Неспецифическая

теория                                                                                       хирургическая ин-

                                                                                                   фекция» практика

Анатомия                                                                                 С/д при инфекцион

«Клетка»                                                                                   ных болезнях:

теория                                                                                       «Методы диагнос-

                                                                                                   тики инфекцион-

                                                                                                    ных болезней»

ПЛАНИРОВАНИЕ ЗАНЯТИЯ ПО ТЕМЕ: «УСТРОЙСТВО БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ПОВЕДЕНИЯ В ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА ЗАБОРА И ДОСТАВКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА В ЛАБОРАТОРИЮ»

ПЛАНИРОВАНИЕ ЗАНЯТИЯ ПО ТЕМЕ: «ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ»

ОСНАЩЕНИЕ ЗАНЯТИЙ.

МЕТОДИЧЕСКОЕ:

1. Тестовый контроль на каждого студента (2 варианта).
2. Направление на микробиологическое исследование на каждый стол.
3. Памятка по отбору патологического материала для серологических, бактериологических исследований на каждого студента.
4. Методическое пособие по теме: «Основы морфологии микроорганизмов» на каждый стол.
5. Правила поведения в бактериологической лаборатории на каждого студента.
6. Таблицы: «Строение бактериальной клетки», «Основные формы бактерий», «Жгутики», «Споры», «Спирохеты», «Сущность метода Грама». Фотографии ученых, внесших вклад в развитие микробиологии       (И.И. Мечников, Л. Пастер и др.).

ТЕХНИЧЕСКОЕ:

Видеомагнитофон, телевизор, диски с фильмами «Устройство микроскопа», «Окраска по Граму».

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ (ЛЕКЦИИ).

Тема лекции №1: «Предмет и задачи микробиологии. История  развития  микробиологии. Классификации микроорганизмов, имеющих медицинское значение».

План изложения лекции

1. Понятие о микробиологии как науке.
2. Предмет изучения микробиологии.
3. Методы исследования микроорганизмов.
4. Этапы в истории развития микробиологии.
5. Отдельные дисциплины микробиологии.
6. Задачи медицинской микробиологии.
7. Основные таксономические единицы в систематике микроорганизмов.

Микробиология  (от греч. «micros» - малый, «bios»-жизнь, «logos»-наука) - наука, изучающая закономерности жизни и развития мельчайших организмов: микроорганизмов – в их единстве со средой обитания.

Основой изучения микробиологии являются микроорганизмы - одноклеточные организмы  невидимые  невооруженным  глазом (бактерии,  вирусы,   вириоиды, грибы, простейшие). Термин «микроб» введен в 1878 г.

Методы исследования микроорганизмов:

1. Микроскопический – изучение морфологии  микроорганизмов с помощью микроскопа.
2. Бактериологический – выделение чистой культуры на питательной среде.
3. Биологический – повторное введение микроорганизма в организм лабораторных животных для подтверждения диагноза.
4. Иммунологический (серологический) -  использование реакций иммунитета (РА, РП, ИФА) для постановки диагноза.
5. Аллергический – выявление специфической сенсибилизации макроорганизма (кожные пробы на дифтерию, бруцеллез и др.)

Микробный мир широк и разнообразен. Микроорганизмы распространены в почве, воде, воздухе, находятся в организме человека, животных и растений. Считают, что весь состав микромира изучен только на10-20 %. Среди микроорганизмов существуют патогенные (заразные) микроорганизмы, которые вызывают инфекции у человека и условно-патогенные, вызывающие заболевание в определенных условиях, как E. сoli. Большинство микроорганизмы - сапрофиты.

Микроорганизмы играют огромную роль в природе и жизни человека, являясь участниками круговорота веществ, расщепляют органические вещества, обеспечивают процессы брожения. Таким образом микроорганизмы определяют возможность существования жизни на Земле.

История  микробиологии  начинается  с А. Левенгука, открывшего в 1675 г. микроскоп. Однако, историческая справка говорит о том, что о роли микроорганизмы предполагали давно. Человек с незапамятных времен знаком с процессами брожения. Еще в трудах Моисея говорилось об омовении рук, сжигании трупов.

Впервые микроорганизмы были открыты Антонио Левенгуком  (1632-1723) при помощи отшлифованной линзы и зарисована им их морфология. С открытия Левенгука начинается I период в истории развития микробиологии - морфологический или описательный период (с 1675 по 1875). С помощью простейшего микроскопа (увеличение в 200 раз) Левенгук рассмотрел  настойку перца, срез пробки, зубной налет, дождевые капли и описал их.

II период развития микробиологии – физиологический (с 1875 по 1950) связан с открытиями Луи Пастера (1822-1895) и Роберта Коха (1848-1910). Этот период имеет научный подход.

Пастер изучал процессы брожения, открыл процессы пастеризации и стерилизации – т.е. действие высокой температуры на микроорганизмы. Он разработал принцип создания вакцин с помощью аттенуации (пассивирование микроорганизмы на несвойственных хозяевах). Аттенуация - снижение вирулентности. Пастер работал над созданием вакцины против сибирской язвы, создал вакцину против бешенства. Именно он ввел термин вакцина («vaca»- корова). Пастер впервые стал использовать исскуственные питательные среды для выращивания микроорганизмы.

Роберт Кох открыл метод получения чистых культур при выращивании на плотных питательных средах; ввел использование анилиновых красителей для окрашивания микроорганизмы, усовершенствовал микроскоп; применил иммерсионную систему и микрофотографирование. Открыл, но не описал палочку туберкулеза – палочку Коха и возбудителя холеры.

III период в развитии микробиологии – иммунологический, связан с именем ученого И. И. Мечникова (1845-1916). В своем труде: «Невосприимчивость к заболеваниям» он создал фагоцитарную теорию, которая внесла неоценимый вклад в теорию иммунитета. Его классическая теория иммунитета основана на признании роли клеточной защиты в развитии невосприимчивости к инфекциям. Он показал, что многие клетки селезенки, костного мозга и др. способны «захватывать» и «переваривать» различные чужеродные элементы, проникшие в организм. Такие клетки он назвал фагоцитами, а явление – фагоцитозом. Учение о фагоцитозе явилось основой для изучения воспаления, которое, как показал Мечников, является активной реакцией организма на внедрение болезнетворных микроорганизмы. Продолжателем Мечникова стал его ученик Безредка.

Большой вклад в развитие микробиологии внесли Л.А. Тарасевич-сподвижник  Мечникова – разрабатывал вакцины против пищевых инфекций.

Н.Ф. Гамалея изучал бешенство, холеру, туберкулез; применил химические вакцины.

Г.Н. Габричевский изучал гемолитический стрептококк-возбудитель скарлатины.

Д.К. Заболотный посветил свои труды борьбе с чумой, холерой, сифилисом.

З.В. Ермольева (1898-1974) впервые ввела в практику пенициллин на территории бывшего СССР, который в годы ВОВ спас тысячи жизней.

С.Н. Виноградский – открыл процесс хемосинтеза- и В.Л. Омелянский явились основоположниками почвенной микробиологии.

В зависимости от экологических и практических потребностей человека наука о микроорганизмах дифференцировалась на ряд дисциплин.

I. Общая микробиология – изучает строение и жизнедеятельность микроорганизмы, распространение их в природе, наследсвенность и изменчивость микроорганизмы.

II. Медицинская микробиология – изучает патогенные для человека микроорганизмы и  взаимосвязь между микроорганизмы и макроорганизмом, разрабатывает методы быстрой и точной диагностики заболеваний и спецпрофилактику, лечение.

Медицинская микробиология состоит из двух частей:

1) общая часть изучает: - вопросы морфологии и физиологии микроорганизмы

- учение об инфекции и иммунитете

2) специальная часть изучает: - свойства возбудителей инфекции

- методы микробиологического исследования

- вопросы патогенеза

- иммунный статус человека против данного возбудителя

Из микробиологии выделяются как самостоятельные дисциплины:

1. Вирусология – наука о вирусах;
2. Протозоология – наука о простейших;
3. Микология – наука о грибах;
4. Иммунология – наука, изучающая защитные реакции организма, их природу;
5. Ветеринарная микробиология – изучает микроорганизмы, вызывающие заболевания у животных, и тесно связана с медицинской, т.к. многие эти микроорганизмы являются возбудителями инфекций у человека;
6. Промышленная микробиология – изучает микроорганизмы, которые используются в производстве пищевых продуктов, антибиотиков, витаминов и т.д.
7. Агромикробиология – изучает микроорганизмы, участвующие в формировании почвенных структур, создание бактериальных удобрений, повышения плодородия почвы.

Систематика микроорганизмов, имеющих медицинское значение.

Классификацию микроорганизмы впервые предложил Карл Линней: бинарная номенклатура на латинском языке.

Высшая таксономическая единица – царство, далее отдел – класс – порядок – семейство – род – вид – вариант (морфовариант, хемовар, фаговар, серовар). Самая низшая инфраподвидовая систематическая категория – штамм.

ЦАРСТВА, изучением которых занимается микробиология, являются:

1. Vira Вирусы
2. Procariotae Бактерии

эукариоты

3. Fungi Грибы
4. Protozoa  (подцарство) Простейшие

Идентифицировать микроорганизм – означает: определить систематическое положение выделенной из какого-либо источника культуры до уровня вида или варианта.

Примеры названий микроорганизмов:

Staphylococcus aureus – стафилококк золотистый

Esherichia coli – кишечная палочка

Neisseria meningitides- гонококки

Micobacterium tuberculosis- туберкулезная палочка

Вопросы по лекции для усвоения материала.

1. Дайте определение науке микробиологии.
2. Назовите предмет изучения микробиологии.
3. Перечислите и раскройте суть методов изучения микроорганизмов.
4. Назовите периоды в развитии микробиологии и перечислите фамилии и заслуги ученых, имена которых связаны с тем или иным этапом.
5. Что изучает наука общая микробиология и другие дисциплины, выделившиеся из этой науки как самостоятельные?
6. Каковы задачи медицинской микробиологии.
7. Назовите фамилию ученого, который систематизировал микроорганизмы.
8. Перечислите основные таксоны в систематике микробов, начиная с высшего таксона.
9. Какие царства живых организмов являются предметом изучения микробиологии.
10. Укажите особенности написания названий микроорганизмов, приводя примеры.

Тема лекции №2 (7 для 164 гр):    «Основы морфологии микроорганизмов».

План изложения лекции

1. Определение микроорганизмов и их свойства.
2. Основные формы бактерий.
3. Строение бактериальной клетки.
4. Дополнительные структуры бактериальной клетки и их функции.
5. Характеристика отдельных групп микроорганизмов.

Микроорганизмы – это организмы невидимые невооруженным глазом. Бактерии - одноклеточные микроорганизмы, лишенные хлорофилла (искл. цианобактерии), морфологически отличающиеся друг от друга по величине, расположению и форме отдельных клеток. Основное общее свойство – это малые размеры, измеряются в микрометрах (мкм), или нанометрах (нм). Средние размеры 2-6 мкм.

Размеры и формы бактерий в зависимости от среды обитания, возраста обладают полиморфизмом, т.е. способностью изменяться морфологически.

Большинство бактерий - сапрофиты (питаются готовыми органическими веществами отмирающих организмов) и  участвуют в обмене веществ в природе, однако есть патогенные виды, вызывающие заболевания у человека, животных и поражают растения.

Различают следующие основные формы бактерий (в основе лежит различные типы деления клеток и их расположения):

1. шаровидная форма – кокки:

а) стафилококки – располагаются в мазках в виде «гроздьев винограда»

б) стрептококки – располагаются цепочкой

1

 в) диплококки: 1) менингококки и гонококки – в виде «кофейных зерен», вогнутой поверхностью обращены друг к другу

2

        2) пневмококки – с противоположных сторон имеют ланцетовидную форму

Это все патогенные для человека микроорганизмы.

Непатогенными микроорганизмами являются:

г) микрококки – располагаются в мазках по одному

        д) сарцины  – располагаются пакетами и тюками

        е) тетракокки – в мазках по четыре

2. палочковидная форма – палочки:      

они более распространены в природе, т.к. многие из палочек способны к спорообразованию. Отличаются по морфологии: длинные, короткие, концы клеток могут быть закруглены (кишечная палочка), отрублены (бациллы сибирской язвы), заострены (фузиформные бактерии), имеют утолщения на концах (коринебактерии дифтерии). После деления располагаются либо поодиночно (иерсинии чумы), либо  под углом к друг к  другу (клостридии столбняка), либо цепочкой (бациллы). Большинство палочек располагаются беспорядочно.

Палочки бывают: - бесспоровые (кишечная палочка),

   - споровые: 1) аэробные, т.е. существуют в кислородных условиях – бациллы сибирской язвы;

 2)  анаэробные,  т.е. существуют в  бескислородных условиях – клостридии ботулизма.

3. изогнутая форма – вибрионы (холерный вибрион);     
4. извитые формы – спириллы, спирохеты (бледная трепонема сифилиса);

Строение и функции бактериальной клетки.

Несмотря на малые размеры, бактерии имеют довольно сложное строение.

Бактериальная клетка состоит из следующих основных структур:

1. трехслойная оболочка, состоящая из:

а) слизистого слоя – выполняет двигательную и защитную функцию;

б) клеточной стенки – обеспечивает «скелет» клетки за счет белкового вещества муреина (пептидогликана), поддерживает осмотическое давление.

За счет клеточной стенки происходит окрашивание микроорганизмов по Граму. У Грам положительных бактерий клеточная стенка толще, чем у Грам отрицательных. Гр+ бактерии окрашиваются по методу Грама в сине-фиолетовый цвет, а Гр- - в розовый. Сущность этого дифференциального  метода состоит в том, что Гр+ бактерии прочно фиксируют комплекс из генцианвиолета и йода (красители), не подвергаются обесцвечиванию спиртом и поэтому не воспринимают дополнительный краситель – фуксин. У Гр- микробов этот комплекс вымывается спиртом из клетки через поры, и они окрашиваются фуксином в розовый цвет.

в) цитоплазматической мембраны (ЦПМ) – контролирует водный и солевой обмен, обладая избирательной проницаемостью. Тесно примыкает к клеточной стенке.

2) Цитоплазма – полость, ограниченная ЦПМ, представляет собой сложную коллоидную систему: гель-вода и растворенные в ней вещества. В ней располагаются органоиды клетки, включения: зерна валютина, капли жира и гликоген. В ней образуются споры. Цитоплазма транспортирует питательные вещества к органоидам клетки.

3) Нуклеоид – представляет собой молекулу ДНК (геном) и является хранителем наследственной информации бактерии, отвечает за изменчивость.

4) Рибосомы – обеспечивают синтез белка.

Дополнительные структуры бактерии.

1. Капсула – поверхностное образование клетки, не является обязательным элементом. Предохраняет клетку от высыхания, обеспечивая вирулентность. Капсулу имеют пневмококки, бациллы сибирской язвы и др.
2. Спора – уплотненный участок клетки, сохраняющий все свойства бактерии. Образуется при неблагоприятных условиях (понижение температуры, недостаток питательных веществ). Споры располагаются в клетке неодинаково:

а) центрально (бациллы),

б) субтерминально (клостридии ботулизма) – ближе к одному из концов клетки,

в) терминально (клостридии столбняка) – на одном из концов клетки.

Это свойство – видовой признак.

3. Жгутики – органы движения клетки, количество их различно. Состоят из белка флагеллина. Расположение жгутиков на клетке различно и является видовым признаком:

а) монотрихи – бактерии, имеющие 1 жгутик (синегнойная палочка),

б) перетрихи -  бактерии, имеющие жгутики по всей поверхности клетки (кишечная палочка),

в) лофотрихи - бактерии, имеющие 1 или пучок жгутиков на одном из концов клетки (палочки сине-зеленого молока),

г) амфитрихи - бактерии, имеющие по пучку жгутиков с обеих сторон (спириллы).

4)   Пили: общие - фимбрии и половые (sex-пили). Фимбрии обспечивают прикрепление к субстрату, а sex-пили участвуют в процессе конъюгации.

Основные группы микроорганизмов.

Актиномицеты – бактерии по внешнему виду напоминают мицеллярные грибы, т.к. имеют форму тонких нитей. В основном обитают в почве и способны к спорообразованию, являются продуцентами антибиотиков. Могут вызывать заболевания у человека – актиномикоз.

Спирохеты – бактерии штопорообразной формы. К ним относят: трепонемы (возбудители сифилиса); бореллия (возбудитель возвратного тифа), лептоспиры (возбудители лептоспироза)

Микоплазмы – самые мелкие из известных организмов, поэтому проходят через бактериологические фильтры. Особенность:  не имеют клеточной стенки. Вызывают заболевания воспалительного характера, однако могут быть сапрофитами.

Риккетсии и хламидии – бактерии, являются облигатными внутриклеточными паразитами, поэтому долгое время их не могли систематизировать: либо вирусы, либо бактерии.

Вирусы – отдельная лекция.

Вопросы по лекции для усвоения материала.

1. Как вы понимаете « идентификация микроорганизмов»?
2. Назовите основные группы микроорганизмов, различающиеся по форме?
3. Как называются шаровидные бактерии?
4. Перечислите формы кокков.
5. В результате какого явления происходит классификация различных кокков.
6. Какие кокки патогенные для человека, а какие непатогенные?
7. Опишите морфологию палочковидных форм микроорганизмов, называя их.
8. Укажите представителей изогнутых и извитых форм.
9. Перечислите главные части микробной клетки, описывая их функции.

10. Назовите дополнительные структурные образования клетки и их функции.

11. Какое вещество придает прочность клеточной стенке?

12. Как располагаются споры в клетках? Опишите процесс        спорообразования.

13. Укажите назначение жгутиков и деление бактерий по их расположению.

14. Дайте характеристику микоплазмам, риккетсиям, хламидиям, актиномицетам.

ЗАДАНИЕ НА САМОПОДГОТОВКУ СТУДЕНТОВ

1.Прочитать в учебнике «Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии» Воробьева А.А. главу I: Предмет и задачи медицинской микробиологии и иммунологии для овладения знаниями.

2. Ознакомиться с работами Л. Пастера по исследованию микроорганизмов в учебнике «Микробиология» Черкеса Ф.К., стр 9-11.

3. Ознакомиться с работами Р. Коха и очерком по истории отечественной микробиологии; «Микробиология» Черкеса Ф.К., стр  11-17.

4. Прочитать в учебнике «Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии» Прозоркиной Н.В., 2002 г, стр 13-25 для овладения знаниями и  ответить на вопросы на стр 25-26.

5. Зарисовать немую схему строения бактериальной клетки, учебник Прозоркиной Н.В. на стр 20 для закрепления материала.

6. Повторить записи в дневнике.

КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ПРАКТИЧЕСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ СТУДЕНТА.

1. Своевременный приход на занятие.
2. Требуемая форма медицинской одежды.
3. Выполнение домашнего задания.
4. Своевременное, аккуратное и правильное оформление дневника.
5. При выполнении практических манипуляций оцениваются способность выполнять работу по инструкции, точность, пунктуальность, дисциплинированность в работе, качество и количество выполненной работы.

ОЦЕНОЧНЫЙ ЛИСТ ПО ТЕМЕ: «Устройство бактериологической лаборатории. Правила поведения в лаборатории. Правила забора и доставки патологического материала в лабораторию».

ОЦЕНОЧНЫЙ ЛИСТ ПО ТЕМЕ: «Основы морфологии микроорганизмов»

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЯ

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. СПб.: Специальная литература, 1998.
2. Красильников А.П. Микробиологический словарь – справочник. Мн.: Беларусь, 1999.
3. Павлович С.А. Медицинская микробиология. Мн.: Высш. Шк., 1997.
4. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология. М.: Медицина. 1980.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ДЛЯ СТУДЕНТОВ

1. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С. и др. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебник. М.: Мастерство; Выс. Шк., 2001.
2. Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.А. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебное пособие для средних специальных медицинских учебных заведений. – Ростов н/Д: Феникс, 2002.
3. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология. Мн.: Медицина, 1987.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ПО ТЕМЕ:

«ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧИ МИКРОБИОЛОГИИ. ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ МИКРОБИОЛОГИИ. КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИМЕЮЩИХ МЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ».

I ВАРИАНТ

1.Предметом изучения микробиологии является:

а) животные                                           б) микроорганизмы

в) функции нуклеиновых кислот         г) все ответы верны

2. Впервые микробы были открыты:

а) Л. Пастером                                       б) Р. Кохом

в) А. Левенгуком                                   г) И. Мечниковым

3. Установите соответствие:

I Морфологический период в микробиологии                      а) Р. Кох

II Физиологический период                                                    б) А. Левенгук

III Иммунологический период                                                в) А. Безредка

4. Медицинская микробиология изучает:

а) распространение микроорганизмов в природе

б) наследственность и изменчивость микроорганизмы

в) свойства возбудителей инфекции

г) строение и жизнедеятельность микроорганизмы

5. Прокариоты – это клетки:

а) ядерные                                                    б) доядерные

в) не имеют ядра                                          г) все ответы верны

6. Расставьте таксоны в необходимом порядке, начиная с высшего:

I класс                  II вид                   III род                    IV царство

7.Наука о грибах:

а) иммунология

б) вирусология

в) протозоология

г) микология

8. Методы изучения микроорганизмов:

а) серологический

б) бактериологический

в) аллергический

г) все ответы верны

9. Бактерии составляют царство:

а) прокариоты

б) вирусы

в) эукариоты

г) микоплазмы

10. Микроорганизмы одного вида, различающиеся по морфологии:

а) серовары

б) патовары

в) морфовары

г) хемоварианты

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ПО ТЕМЕ:

«ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧИ МИКРОБИОЛОГИИ. ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ МИКРОБИОЛОГИИ. КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИМЕЮЩИХ МЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ».

II ВАРИАНТ

1. Микроорганизмы:

а) невидимы невооруженным глазом

б) распространены повсюду

в) могут быть сапрофитами и паразитами

г) все ответы верны

2. Микробиология – наука, изучающая:

а) микроорганизмы

б) животных

в) строение клеток

г) функции нуклеиновых кислот

3. Установите соответствие:

I Микроскопический метод                   а) применение микроскопа

II Бактериологическй метод                   б) исследование защитных реакций        организма

III Серологический метод                    в) использование искусственных питательных сред

4. Иммунологический период связан с именем ученого:

а) Л. Пастера

б) Р. Коха

в) А. Левенгука

г) А. Безредке

5. Протозоология – это наука о:

а) вирусах

б) грибах

в) простейших

г) иммунитете

6. Основной таксономической единицей для постановки диагноза является:

а) вариант

б) вид

в) род

г) царство

7. Общая микробиология изучает:

а) только патогенных микроорганизмов

б) строение и жизнедеятельность микроорганизмов

в) учение об инфекции

г) все ответы верны

8. Варианты внутри вида, отличающиеся по биохимическим свойствам:

а) штамм

б) морфовар

в) фаговариант

г) хемовар

9. Расставьте таксоны в правильном порядке, начиная с низшего

I вариант

II род

III вид

IV класс

10.Систематику микроорганизмов впервые предложил:

а) Левенгук

б) Безредка

в) Линней

г) Гук

ТЕСТОВЫЙ  КОНТРОЛЬ  ПО  ТЕМЕ:

«ОСНОВЫ  МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ»

I ВАРИАНТ

1. В основе деления микроорганизмов на группы лежит:

а) морфология клеток

б) различные типы их деления

в) расположение в мазке

г) все ответы верны

2.Гонококки –это шаровидные бактерии, в мазках выглядят как:

а) вибрионы

б) микрококки

в) диплококки

г) сарцины

3. Стрептококки в мазке располагаются:

а) цепочками

б) тюками

в) скоплениями в виде гроздьев

г) поодиночно

4. Актиномицеты характеризуются следующими свойствами:

а) имеют вид тонких нитей

б) в основном обитают в почве

в) на концах клеток образуют споры

г) все ответы верны

5. Вибрионы – это:

а) извитые палочки

б) изогнутые палочки

в) тетракокки

г) микрококки

6. К спорообразованию способны:

а) стафилококки

б) бациллы

в) стрептококки

г) кишечная палочка

7. Хранителем наследственной информации у бактерий является:

а) спора

б) цитоплазма

в) капсула

г) нуклеоид

8. Эти микроорганизмы являются внутриклеточными паразитами:

а) хламидии

б) сарцины

в) стрептококки

г) клостридии

9. Флагеллин – это белок, входящий в состав:

а) оболочки

б) капсулы        

в) жгутиков

г) цитоплазмы

10. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

а) фиксация

б) приготовление мазка

в) окрашивание

г) высушивание

11. Укажите соответствия:

I Световая обычная микроскопия                 а) для изучения живых неокрашенных препаратов

II Фазово–контрастная микроскопия              б) для изучения окрашенных препаратов

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ПО ТЕМЕ:

«ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ»

II ВАРИАНТ

1. Сапрофитные микроорганизмы питаются:

а) органическими веществами мертвых организмов

б) неорганическими веществами

в) органическими веществами живых организмов

г) все ответы верны

2. Стафилококки в мазке располагаются:

а) цепочкой

б) попарно

в) в виде гроздьев

г) тюками

3. Сарцины имеют форму:

а) шаровидная

б) изогнутая

в) палочковидная

г) извитая

4. Бактерии штопорообразной формы называются:

а) вибрионы

б) спириллы

в) спирохеты

г) клостридии

5. В состав клеточной стенки бактерии входит:

а) крахмал

б) флагеллин

в) муреин

г) альбумин

6. Перитрихи- бактерии, имеющие следующее расположение жгутиков на клетке:

а) по всей поверхности клетки

б) на одном из концов клетки

в) на обоих концах клетки

7. Дополнительной структурой бактерии является:

а) нуклеоид

б) цитоплазма

в) ЦПМ

г) капсула

8. Бациллы - это:

а) аэробные споровые палочки

б) извитые бесспоровые бактерии

в) бесспоровые кокки

г) анаэробные споровые палочки

9. Укажите функцию нуклеоида в бактериальной клетке:

а) синтезирует белок

б) обеспечивает форму клетки

в) придает подвижность клетке

г) является хранителем наследственной информации

10. Грам отрицательные микробы:

а) окрашиваются в сине-фиолетовый цвет

б) образуют стойкий комплекс с основными красителями

в) имеют красную окраску

11. Укажите соответствие:

I Физический вид фиксации препарата       а) ацетон

II Химический вид фисации                         б) р-р спирта

                                                                          в) пламя горелки  

ОТВЕТЫ К ТЕСТОВОМУ КОНТРОЛЮ

Тема: «ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧИ МИКРОБИОЛОГИИ. ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ МИКРОБИОЛОГИИ. КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, ИМЕЮЩИХ МЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ».

I ВАРИАНТ                                                             II ВАРИАНТ

1. Б                                                                            1. Г

2. В                                                                            2. А

3. I- Б, II – А, III – В                                                 3. I-А, II-В, III-Б

4. В                                                                            4. Г

5. Б, В                                                                        5. В

6. IV, I, III, II                                                             6. Б

7. Г                                                                             7. Б

8. Г                                                                             8. Г

9. А                                                                             9. I, III, II, IV

10. В                                                                          10. В

ОТВЕТЫ К ТЕСТОВОМУ КОНТРОЛЮ

Тема: «ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ»

I ВАРИАНТ                                                             II ВАРИАНТ

1. Г                                                                             1.А

2. В                                                                             2. В

3. А                                                                             3. А

4. Г                                                                              4. В

5. Б                                                                              5. В

6. Б                                                                              6. А

7. Г                                                                              7. Г

8. А                                                                              8. А

9. В                                                                              9. Г

10.Б, Г, А, В                                                              10. В  

11. I – Б, II – А                                                          11. I – В, II – А,Б

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ ПО ТЕМЕ:

«ОСНОВЫ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ»

Задача №1: У больного, обратившегося в поликлинику, отмечается повышенная температура тела, кашель, образование мокроты и боли в груди. Исследовав мокроту больного, в мазках были обнаружены ланцетовидные диплококки. Какие микроорганизмы вызвали инфекцию? (пневмококки)

Задача №2: В больницу попал пациент, у которого отмечалась отечность задней стенки глотки на фоне почти неизменного мягкого неба и повышенная температура. Используя микроскопический метод в мазках были выявлены Гр- диплококки. Укажите, что за бактерии могли вызвать данные клинические симптомы. (менингококки)

Задача №3: У оперированного больного имело место нагноение хирургической раны. При микроскопии гноя обнаружились типичные кокки, располагающиеся в мазке в виде грозди винограда, Гр+. Назовите эти микроорганизмы. (стафилококки)

Задача №4: Пациент обратился к врачу с жалобами на сухость во рту, головную боль, нервно-паралитические явления, расстройства ЖКТ. Было выяснено, что накануне пациент употреблял консервы. В мазках были обнаружены типичны палочки, образующие спору и окрашивающиеся по Граму положительно. Назовите эти бактериальные клетки. (клостридии)

СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ И ПОНЯТИЙ

По теме: «Устройство бактериологической лаборатории. Правила поведения в лаборатории. Правила забора и доставки патологического материала в лабораторию»

1. Автоклав – аппарат для стерилизации объектов насыщенным водяным паром под давлением.
2. Боксы – специальные изолированные помещения, часть помещения или камеры, предназначенные для выполнения работ, требующих особой стерильности, или безопасного пребывания людей.
3. Виварий – помещение, экспериментально-биол. лаборатория (клиника), предназначенная для содержания лабораторных животных и проведения на них экспериментов.
4. Лаборатория – учебное, научное, практическое, производственное учреждение или подразделение такого учреждения, предприятия, выполняющие экспериментальные, контрольные или аналитические исследования.

По теме: «Предмет и задачи микробиологии. История  развития  микробиологии. Классификации микроорганизмов, имеющих медицинское значение».

1. Антонио Левенгук (1632-1723гг)
2. А.М. Безредка (1868-1940гг)
3. И.И. Мечников (1845-1916гг)
4. Луи Пастер (1822-1895гг)
5. Роберт Кох (1845-1910гг)
6. Вариант – инфравидовая систематическая категория; группа штаммов, отличающаяся от типового для вида штамма одним или несколькими  стабильными существенными признаками.
7. Классификация – система связей с совокупностью субъектов, объединенных в таксоны по сходству признаков и общности происхождения.
8. Патогенность – видовой полидетерминантный признак возбудителя, обозначающий его потенциальную способность вызывать инфекционный процесс у хозяина.
9. Таксон – любая таксономическая группа выше или ниже вида, имеющая научное название.
10. Штамм – низшая инфраподвидовая систематическая категория, обозначающая чистую культуру какого-либо вида, подвида, варианта, выделенную из того или иного источника.

По теме: «Основы морфологии микроорганизмов»

1. Бактерии – группа микроскопических одноклеточных организмов.
2. Вирулентность – степень патогенности (см. патогенность).
3. Грамма метод – м-д дифференцированной окраски бактерий.  
4. Идентификация микроорганизма – система исследований, направленных на установление признаков, определяющих вид, тип, род микроорганизма.
5. Муреин (пептидогликан) – макромолекулярный полимер, специфичный для прокариотов.
6.  R-пили – класс пили, которые образуются под контролем F-фактора, возникают на поверхности бактерий в процессе конъюгации и выполняют функцию органеллы.

ВЫПИСКА ИЗ РАБОЧЕЙ ПРОГРАММЫ

Дисциплина: «Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии»

для специальности  «Лечебное дело»,  «Сестринское дело», «Акушерское дело»

ГБОУ СПО СК «Пятигорский медицинский колледж»

РУКОВОДСТВО ДЛЯ СТУДЕНТОВ

К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

ПО МИКРОБИОЛОГИИ

2011г.

ГБОУ СПО СК «Пятигорский медицинский колледж»

Е.В. Аношко

РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

 по курсу «Основы микробиологии и иммунологии»

раздел «Морфология микроорганизмов»

Руководство для студентов

Специальности: «Сестринское дело»

                         «Акушерское дело»

                      «Лечебное дело»

2

РЕЦЕНЗИЯ

на руководство к практическим занятиям

 по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»

раздел «Морфология микроорганизмов»,

составленное преподавателем микробиологии Е.В. Аношко

Представленная работа составлена в соответствии Государственного стандарта и квалификационной характеристики  по специальностям «Сестринское дело» «Акушерское дело» «Лечебное дело».

Построено в соответствии современными педагогическими и методическими требованиями. Данное руководство обеспечит самостоятельность студентов в работе на практических занятиях по микробиологии и облегчит педагогический процесс. Для эффективного усвоения материала имеются вопросы и тестовые задания для студенческого самоконтроля. По каждому занятию указан объем выполняемой практической работы. Приведенные в работе алгоритмы, рисунки, схемы помогут систематизировать и закрепить знания студентов по данной теме.

В руководстве приводится микроскопический метод исследования микроорганизмов, который позволяет изучить тинкториальные и морфологические свойства микроба, степень чистоты выделенной культуры,  расположение микроорганизмов в мазках. Все эти признаки необходимы для идентификации микроорганизма. С помощью этого метода можно подтвердить клинический диагноз  инфекционных заболеваний.

Учебное пособие предназначено для использования во время практических занятий по микробиологии раздел «Морфология микроорганизмов», а также для самостоятельной работы студентов дома.

Рецензент:

3

СОДЕРЖАНИЕ

Предисловие…………………………………………………...……...5

Занятие №1…………………………………………………………....6

Занятие №2 (8 для 164 гр)……………………………………………16

Тестовые задания ………………………………………………...…..19

Ответы на тестовые задания ………………………………………...21

Приложение №1……………………………………………………....22

Приложение №2……………………………………………………....23

Приложение №3……………………………………………………....24

Литература ……………………………………………………………25

Интернет ресурсы …………………………………………………….25

4

ПРЕДИСЛОВИЕ

Лабораторные занятия проводятся в специально оборудованных помещениях. Поверхность рабочих столов покрыта специальным составом для лучшей дезинфекции. За каждым студентом закрепляется постоянное рабочее место, на котором должно быть оборудование, необходимое для выполнения конкретного задания, рабочая тетрадь, ручка и карандаш. Для личных вещей отводится специальное место.

В начале занятия студенты знакомятся с определенным заданием, изложенным в учебном пособии, делают записи основных методик в рабочей тетради, а затем приступают к выполнению работы под наблюдением преподавателя. Результаты исследований в виде рисунков, описаний морфологии микроорганизмов заносятся в тетрадь, и работа представляется преподавателю для проверки.

В связи с тем, что на практических занятиях студенты работают с живыми культурами микробов, анилиновыми красителями, химическими веществами, а также используют электрические приборы (лампы) и спиртовки, они обязаны выполнять основные правила техники безопасности (приложение №1,2).

Все задания студентами выполняются самостоятельно в соответствии с задачами, поставленными в учебном пособии.

5

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №1 (для всех групп)

Тема «Устройство бактериологической  лаборатории. Правила поведения в лаборатории. Правила забора и доставки патологического материала в лабораторию. Микроскоп».

Студент должен знать:

- технику безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии (приложение №1),

- требования к помещению и оборудованию в лаборатории  (приложение №2),

- характеристику «грязной» и «чистой» зоны лаборатории. Перечень комнат и их предназначение,

- требования к проведению работ в бактериологической лаборатории.

- устройство микроскопа

- технику микроскопирования готовых препаратов

     Студент должен уметь:

- доставлять патологический материал. Материал на патогенные биологические агенты (ПБА),

- составлять направление на бак. анализ

- принимать материал в регистратуре,

- обрабатывать отработанный материал и лабораторную посуду,

-микроскопировать готовые препараты.

6

Лаборатория снабжена рядом обязательных приборов и аппаратов:

1. Приборы для микроскопии: биологический иммерсионный микроскоп с

дополнительными приспособлениями (осветитель, фазово-контрастное

устройство, темнопольный конденсор и др.), люминесцентный

микроскоп.

2. Термостаты и холодильники.

3. Приборы для приготовления питательных сред, растворов и т.д.: аппарат

для получения дистиллированной воды (дистиллятор), технические и

аналитические весы, рН-метры, аппаратура для фильтрования, водяные

бани, центрифуги.

4. Набор инструментов для манипуляций с микробами: бактериологические

петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.

5. Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы,

ампулы, пастеровские и градуированные пипетки, микродозаторы  и др.

6. Аппаратура для стерилизации: автоклавы, сухожаровые шкафы,

бактерицидные лампы.

Каждое рабочее место снабжается спиртовкой и сосудом с дезинфицирующим раствором.

Правила работы в кабинете микробиологии

1.  В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды: халата, тапочек, сменной обуви.

2.  В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу.

3.  При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дезинфицирующим раствором: переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дезинфицирующий раствор.

4.  Если разбилась посуда. Содержащая заразный материал (пробирка, чашка Петри),  немедленно производится обеззараживание предметов, дежды, стола и помещения.

5.  После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола.

6.  Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник, закрывают и опечатывают.

7.  Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбудителями которых они работают. Для

7

практического обучения в кабинете микробиологии используются материалы, содержащие возбудителей III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Краевой ГЭС.

Правила забора клинического материала для исследований в бактериологической лаборатории.

При заборе и работе с клиническим материалом персонал должен использовать перчатки и халат. Сроки доставки клинического материала в лабораторию должны быть сокращены до минимума.

Кровь для посева следует брать до начала антибактериальной терапии; на высоте подъема температуры; у постели больного с соблюдением правил асептики. Посев производится в двойную и тиогликолевую среду в соотношении 1:10.

Моча для посева берется до начала антибактериальной терапии. Моча здорового человека стерильна. От начала взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.

Гной получают с помощью стерильного шприца или стерильного ватного тампона.

Испражнения на патогенные энтеробактерии берут ректальными петлями, смоченными консервантом, и помещают в пробирку с консервирующей средой.

Слизь из носоглотки (на дифтерию) забирают стерильным тампоном натощак. Тампон помещают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию не позже 2-3 часов с момента забора материала.

Спинно-мозговую жидкость получают в результате люмбальной пункции. 3-5 мл ликвора помещают в пробирку (при транспортировке предохранять от охлаждения).

Мокроту собирают натощак после ополаскивания рта в стерильную посуду

8

Направление на исследование является сопроводительным документом, который прилагается к инфекционному материалу, предназначенному для лабораторных исследовании.

Составляется  по следующей форме:

1.  название материала

2.  учреждение, направляющее материал

3. фамилия, имя отчество больного

4. возраст

5. адрес больного

6. дата заболевания

7. дата взятия материала

8. предполагаемый клинический диагноз

9. подпись врача, направляющего материал

Поступивший в лабораторию инфекционный материал  регистрируется в специальном журнале.

Микроскоп.

Микроскоп (рис.1) - оптический прибор для изучения  микрообъектов. Студенческие лаборатории чаще оснащены микроскопами МБИ-1 . В научных и практических микробиологических лабораториях используют микроскопы отечественных марок: МБР – 1, МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, Биолам Р-1 и другие. Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков микроорганизмов, величина которых не менее 0.2-0.3 мкм. Поскольку микро бы  очень малы, то  измеряются они в микрометрах (мкм - тысячная доля миллиметра) и потому изучение  их  возможно только с помощью микроскопов, дающих достаточно большое увеличение. Общее увеличение микроскопа слагается из  произведения  увеличений объектива и окуляра. Обычно при микробиологических исследованиях для получения полезного  увеличения в 600-1000 раз используют объективы с увеличением в 90-100 раз и окуляры, увеличивающие изображение в 7-10 раз.

9

Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные. При работе с сухими объ ективами между фронтальной линзой и изучаемым объектом находится воздух. При этом, в виду раз ницы коэффициентов преломления предметного сте кла и воздуха, часть световых лучей отклоняется и не попадает в объектив.

Объективы иммерсионные обозначают буквами О.И. и цифрами х90 и  х100. Современные микроскопы имеют ряд усовершенствований. Так, бинокулярный микроскоп с двумя тубусами дает возможность вести наблюдение однов ременно обоими глазами.

Для изучения неокрашенных объектов используется фазово-контрастное устройство, с  помощью которого можно получить четкое контрастное  изображение прозрачных, не имеющих окраски микроорганизмов. При  прохождении света через  окрашенный  препарат, изменяется интенси вность света (амплитуда световой волны), что лег ко улавливается глазом. При прохождении же пучка света через неокрашенный, прозрачный объект изме няется только скорость его движения, т.е. фаза ко лебаний светового луча, что глазом не улавливается. Принцип фазово-контрастного устройства заклю чается в переводе невидимых колебаний света в амплитудные видимые.

Рис 1. Микроскоп:

1 – окуляр,

2 – тубус,

3 – штатив,

4 – револьвер объективов,

5 – предметный столик,

6 – конденсор,

7 – микровинт,

8 –   макровинт

9 – зеркало,

10 – основание

10

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

1. Просмотр учебного фильма «Микроскоп».
2. Получить микроскопы и препараты для микроскопирования.
3. Освоить технику микроскопирования при малом и большом увеличении (Приложение 3).
4. Настроить для работы микроскоп.
5. Промикроскопировать готовые препараты.
6. Зарисовать в тетради просмотренные препараты.
7. Описать увиденные бактерии.
8. Закончить микроскопирование и сдать микроскопы преподавателю.

11

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 2 (8 для 164гр.)

Тема: Простые и сложные методы окрашивания. Окраска препаратов по методу Грама.

Студент должен знать:

- этапы приготовления препарата, его фиксация: виды и цель,

- простые методы окрашивания,

- сложные методы, сущность метода Грама,

- особенности окраски по методу Грама, красители и реактивы.

Студент должен уметь:

- поведение при «аварии» в лаборатории,

- приготовление бактериального препарата,

- окраска препарата по методу Грама,

-микроскопия окрашенных препаратов с использованием         иммерсионной системы,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

1. Просмотреть учебный фильм «Окраска по Граму».
2. Подготовить препараты и окрасить их простым методом и по методу Грама.
3. Препараты промикроскопировать с иммерсией.
4. Обработать рабочие места и руки.
5. Зарисовать результаты микроскопирования в дневник.

ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА

1. Приготовление мазка
2. Высушивание
3. Фиксация
4. Окрашивание

12

АЛГОРИТМ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА

из культуры, выращенной на скошенном агаре.

1. Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры
2. Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта.
3. Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок.
4. Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри.
5. В левую руку берут пробирку со стерильным физическим раствором (дистиллированной водой) и помещают между 1 и 2 пальцами таким образом, что ладонь находится под пробиркой и горлышко пробирки направлено в зону спиртовки.
6. В правую берут бактериальную петлю, как карандаш
7. Петлю фламбируют до покраснения сначала горизонтально, затем вертикально (рис. №1)
8. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку физ.р-ра к ладони и осторожно вынимают е из пробирки. Движения должны быть плавными.
9.  Горло пробирки обжигают в пламени и вводят петлю.
10.  Берут выпускной петлей физ. р-р  и выносят на стекло пару капель в границы мазка.
11.  Закрывают пробку, предварительно проведя через пламя спиртовки пробку и горло пробирки одновременно
12.  Ставят пробирку в штатив.
13.  В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. р-ром (см. пункт №5), петля в правой руке
14.   Петлю фламбируют.
15.  Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры (см. пункт №8), одновременно обжигая пробку и горло пробирки
16.  Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки
17.  Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки
18.  Петлю с культурой вносят в каплю физ. р-ра и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка.
19.  Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки.
20.  Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку.
21.   Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив
22.  Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо  высоко над пламенем спиртовки.

13

Примечание:

1. Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. р-ра. Мазок готовят согласно пунктам №13 -№22
2.  При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо:

1. отметить изолированную колонию со стороны дна чашки
2. чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее 1и 2 пальцами левой руки
3. прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку
4. осторожно откалывают часть  выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. р-ром
5. дальнейшие манипуляции согласно пунктам №18, 19, 21, 22

3. При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки

Рис. №1.

Схема приготовления мазка

Виды фиксации

1. Физический – в пламени спиртовки
2. Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1:1 спирт и эфир)

Цели фиксации

1. Обеззараживание патогенных микробов
2. Закрепление клеток на стекле
3. Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители

СПОСОБ ГРАМА

1. На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1-2 мин
2. Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин
3. Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15-20 сек в зависимости от толщины мазка
4. Спирт смыть дистиллированной водой
5. Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2-3 мин
6. Краситель смыть  водой, препарат высушить, промикроскопировать.
7. Микроскопия с иммерсией.

Генцианвиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки (рис. №2). Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой – грамотрицательных – мало. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса – краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные остаются окрашенными в синий цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный цвет.

15

Рис. № 2.  Грамотрицательные и грамположительные бактерии

16

Стрептококки Гр+
кокки, располагающиеся в виде цепочек

Streptococcus piogenes
Enterococcus faecalis

Стафилококки  Гр+

кокки, располагающиеся в

виде скоплений,

напоминающих

виноградную гроздь

Staphylococcus aureus
           Staphylococcus epidermidis

Бактерии Гр-
палочковидные неспорообразующиие микроорганизмы

Esherichia coli
Salmonella typhi
Mycobacterium tuberculosis

Клостридии Гр+
палочковидные спорообразующие микроорганизмы. Диаметр спор больше поперечника клетки

Clostridium perfringens
Clostridium tetani
Clostridium botulinum

Вибрионы Гр-

Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus

17

ПРАВИЛА ИММЕРСИОННОЙ  МИКРОСКОПИИ

1. Микроскоп устанавливают в рабочее положение – увеличение объективов
2. Устанавливают освещение, включая лампу или направляя свет на зеркало микроскопа. Конденсор должен быть поднят до упора, диафрагма открыта  (рис. №3)
3. На препарат наносят каплю иммерсионного масла
4. Препарат помещают на предметный столик и фиксируют его клеммами
5. Наблюдая сбоку, опускают тубус с объективом 90х, 100х макровинтами в масло почти до соприкосновения с препаратом
6. Затем, глядя в окуляр (7х, 10х), макровинтом очень медленно поднимают объектив до появления изображения и с помощью микровинта производят окончательную фокусировку  четкого изображения
7. При микроскопии определяют взаимное расположение микроорганизмов, их размеры, форму, структуру, окраску
8. После просмотра препарата револьвер переводят на малое увеличение 8х и только после этого препарат снимают со столика
9. Фронтальную линзу объектива протирают марлей, смоченной чистым  бензином или эфиром для удаления остатков иммерсионного масла
10. Затем опускают предметный столик (или конденсор в микроскопах с неподвижным столиком) сдают микроскопы преподавателю.

Рис. №3. Рабочие положения микроскопов

18

Тестовый контроль

01. К шаровидным бактериям относятся

а) вибрионы

б) сарцины

в) диплобактерии

г) спириллы

02. В виде цепочки располагаются

а) стафилококки

б) стрептококки

в) тетрококки

г) менингококки

03. В виде виноградных гроздей располагаются

а) менингококки

б) стрептококки

в) стафилококки

г) тетрококки

04. Характеристика лофотрихий

а) имеют один жгутик

б) жгутик располагается в виде пучков по обоим концам

в) жгутики располагаются в виде пучка на одном конце бактерии

г) жгутики располагаются по периметру

05. По расположению жгутиков бактерии делятся

а) на амфитрихии

б) на диплококки

в) аутотрофы

г) гетеротрофы

19

06. Споры образует

    а) возбудитель Ботулизма

    б) брюшнотифозная палочка

    в) кишечная палочка

    г) холерный вибрион

07. Грамотрицательные бактерии окрашиваются

а) метиленовым синим

б) генцианвиолетом

в) фуксином

г) раствором Люголя

08. В виде тюков или пакетов располагаются

а) сарцины

б) микрококки

в) стафилококки

г) стрептококки

09. Папочковидную форму имеют

а) спириллы

б) сарцины

в) бактерии

г) спирохеты

10. К облигатным анаэробам относятся

а) возбудители дизентерии

б) брюшнотифозная палочка

в) клостридия ботулизма

г) холерный вибрион                     20

Эталоны  ответов

10.          В

21

ПРИЛОЖЕНИЕ №1

Техника безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии

Правила работы со спиртовкой

1. Заправленную спиртовку хранят плотно закрытой притертым колпачком, чтобы предотвратить испарение спирта с фитиля.
2. При зажигании спиртовки нужно снять колпачок и поджечь фитиль спичкой. При этом нельзя сдвигать держатель фитиля, т.к. пламя проскочит внутрь спиртовки, что вызовет сильную вспышку и разбрызгивание горящего спирта
3. Нельзя зажигать спиртовку от другой уже горящей спиртовки, т.к. при этом может сдвинуться держатель фитиля и вылиться спирт
4. Нельзя дуть на пламя, чтобы погасить спиртовку. Для этого следует аккуратно закрыть спиртовку колпачком.
5. Необходимо следить за тем, чтобы спиртовка не перегревалась. Это ведет к испарению спирта и опасности взрыва
6. При длительном нагревании лучше пользоваться двумя спиртовками
7. Не следует при работе наклонять голову над спиртовкой, т.к. при накоплении паров спирта под держателем фитиля может происходить самопроизвольное вспыхивание

Правила пользования ручным химическим пенным огнетушителем

 ОХП -10

В случае возникновения пожара необходимо:

1. Для приведения огнетушителя в действие – ручку верхней части корпуса поворачивают на 180о и переворачивают огнетушитель вверх дном
2. Струю пены следует направлять не в центр пламени, а под минимальным углом к поверхности горения в нижнюю часть пламени, последовательно сбивая и оттесняя его от краев к центру
3. При тушении огня ОХП – 10 необходимо обесточить все помещения с помощью рубильника, т.к. химическая пена в составе огнетушителя обладает высокой электропроводностью
4. ОХП – 10 применяют для тушения крупных очагов возгорания, когда другие средства малоэффективны

22

ПРИЛОЖЕНИЕ №2

Правила работы в микробиологической лаборатории

1. Работа с заразным материалом требует особой тщательности и соблюдения правил личной и общественной безопасности при ее выполнении
2. В помещении лаборатории необходимо строго соблюдать чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Запрещается прием пищи, излишние разговоры, суета
3. Работа обязательно проводится в халате, шапочке, сменной обуви
4. Каждый студент имеет в лаборатории свое постоянное рабочее место
5. Материал для работы принимает дежурный по бригаде у лаборанта и раздает студентам в присутствии преподавателя
6. В начале занятия необходимо записать в тетрадь дату, номер, тему занятия, план выполняемой работы. В процессе работы делаются записи и зарисовки в дневник.
7. Все предметы, использованные при работе с живой культурой, обезвреживаются.
8. В конце занятия студенты сдают весь материал дежурному по бригаде, а он лаборанту или преподавателю.
9. В конце занятия студент должен:

- привести в порядок свое рабочее место

- сдать микроскоп, материал дежурному

- вымыть руки дез. раствором, а затем мылом

- представить преподавателю для подписи дневник

23

Приложение 3

Правила работы с сухими объективами.

Приготовленный препарат помещают на предметный столик и закрепляют зажимами. С помощью сухого объектива с увеличением x7 просматривают несколько полей зрения.

Передвигают предметный столик боковыми винтами.

Нужный для исследования участок препарата устанавливают в центре поля зрения.

Поднимают тубус и вращением револьвера переводят объектив с увеличением x40, наблюдая сбоку, макрометрическим винтом снова опускают тубус с объективом почти до соприкосновения с препаратом. Смотрят в окуляр, очень медленно поднимают тубус до появления контуров изображения.

Точную фокусировку производят с помощью микрометрического винта, вращая его в ту или другую сторону, но не более чем на один полный оборот. Если при вращении микрометрического винта чувствуется сопротивление, значит, ход его пройден до конца. В этом случае поворачивают винт на один-два полных оборота в обратную сторону, снова находят изображение при помощи макрометрического винта и переходят к работе с микрометрическим винтом.

Полезно приучить себя при микроскопировании держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно, так как при этом меньше утомляется зрение.

24

Литература

1. Борисов Л.Б.
2. Микробиология, иммунология, вирусология. Издательство: МИА, 2005.
3. Воробьёв А.А.
4. Медицинская и санитарная микробиология: Учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб. заведений / А.А. Воробьёв, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков. – М.: Издательский центр «Академия», 2003.
5. Воробьёв А.А., Быков А.С.
6. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии6 Учебное пособие для студентов медицинских вузов. -М.: Медицинское информационное агентство, 2003.
7. Воробьёв А.А.
8. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Издательство: МИА, 2008.
9. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. Под редакцией Л.Б. Борисова и А.М. Смирновой. М.: Медицина, 1994.
10. Медицинская микробиология. Под редакцией В.И. Покровского. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА 1998.
11. Методы общей бактериологии. Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Никишина Н.М.. Ульяновск: изд-воУГСХА, 1998.

   Интернет ресурсы:

1. meduniver.com/Medical/Microbiology/  Микробиология. Медицинская микробиология. Рисунки по микробиологии. Статьи по микробиологии.
2. www.booksmed.com/mikrobiologiya/  Электронные учебники по микробиологии.
3. microbiologu.ru/   Справочные материалы по предмету.
4. http://dic.academic.ru/dic.nsf/bse/109036/   Микробиология. Словари и энциклопедии.

25