Презентация "Нуклеиновые кислоты и методы их исследования"

Слайд 1

Слайд 2

Задачи: 1.Изучить литературу по данному вопросу 2.Рассмотреть особенности строения и функций нуклеиновых кислот 3.Раскрыть особенности существующих методов изучения нуклеиновых кислот Цель : Характеристика видов нуклеиновых кислот и методов их исследования

Слайд 3

Нуклеиновые кислоты по составу и выполняемой функции классифицируются на два вида – ДНК и РНК. ДНК – дезоксирибонуклеиновые кислоты- содержатся в ядре клетки; в структуре их молекул записана генетическая информация организма. РНК – рибонуклеиновые кислоты – подразделяются на несколько видов и содержатся в плазме клетки, в рибосомах. Классификация нуклеиновых кислот.

Слайд 4

1 . Являются строительными блоками нуклеиновых кислот, участвуют в молекулярных механизмах, с помощью которых генетическая информация хранится, реплицируется и транскрибируется. 2. Выполняют важную роль в энергетическом (фосфорном) обмене, в аккумулировании и переносе энергии. 3. Служат кофакторами ферментов, относящихся к различным классам. 4. Играют важную роль в синтезе и распаде углеводов, жирных кислот и липидов. 5. Некоторые нуклеотиды являются посредниками в сложных процессах сигнальной трансдукции (передачи сигналов в живых клетках ). Функции нуклеиновых кислот.

Слайд 5

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях ( in vitro ). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции . При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Принцип ПЦР.

Слайд 7

В начале 1970-х годов норвежскому ученому Хьеллю Клеппеиз лаборатории нобелевского лауреата Хара Гобинды Хораны пришла в голову мысль, что можно амплифицировать ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК — синтетических праймеров . В то время эта идея осталась невостребованной. Зато в 1983 году она была успешно реализована Кэри Маллисом . Его целью было создание метода, который бы позволил амплифицироватьДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы . Через 7 лет после опубликования результатов своих исследований, в 1993 г., Маллис получил за создание метода ПЦР Нобелевскую премию. В основе метода ПЦР лежит природный процесс - комплементарное достраивание ДНК матрицы, осуществляемое с помощью фермента ДНК-полимеразы. Эта реакция носит название репликации ДНК. История ПЦР.

Слайд 8

Kjell Kleppe Kary Mullis

Слайд 10

Подготовка и проведение ПЦР.

Слайд 11

Детекция продуктов ПЦР. Гель-электрофорез.

Слайд 12

Реакционная смесь для ПЦР состоит из следующих компонентов, которые обязательно должны быть добавлены в пробирку: 1 ) термостабильного фермента ДНК-полимеразы; 2 ) двух олигонуклеотидных праймеров (обычно 20 нуклеотидов длиной), подобранных на специфический участок ДНК, который необходимо копировать; 3 ) четырех дезоксирибонуклеотидов ( dNTPs ); 4 ) ДНК или РНК, выделенной из клинического образца; 5 ) набора солей определенной кислотности (буферная система), в которой ДНК-полимераза эффективно работает, обязательно содержащего ионы Mg2 +. Компоненты реакционной смеси для ПЦР

Слайд 13

Праймеры - синтетические олигонуклеотиды , состоящие из 16-30 оснований. Они комплементарны участкам ДНК, между которыми находится последовательность-мишень. Праймер (англ. primer ) является обязательным компонентом («затравка»), необходимым для работы ДНК-полимеразы: к его 3’-ОН концу фермент присоединяет нуклеотиды, комплементарные матрице. Праймер к 5’-концу гена называют прямым ( forward , For ), к 3’-концу гена - обратным или встречным ( reverse , Rev ). В базах данных нуклеотидных последовательностей приведена только одна цепь ДНК - значащая, та, что транскрибируется в виде мРНК . По ней подбирают прямой праймер , т.е. тот праймер , от которого будет расти именно эта цепь. Обратный праймер подбирают для комплементарной цепи, но также в направлении 5’→3’. Праймеры .

Слайд 14

Для ПЦР-лаборатории выбирайте отделочные материалы, мебель и оборудование, устойчивые к мытью, обработке дезинфицирующими средствами и ультрафиолетовым облучением . Для стен и пола используйте кафельную плитку (предпочтительно ). Все поверхности должны быть гладкими, без трещин или щелей . На окна поставьте надежные запирающие устройства. Можете использовать светозащитные пленки из материалов, устойчивых к дезинфектантам . Устанавливать жалюзи нельзя — они адсорбируют пыль . Каждое рабочее помещение оборудуйте водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением, средствами пожаротушения, естественным и искусственным освещением, а также приточно-вытяжной вентиляцией. Требования к отделке помещений.

Слайд 15

Оборудование для ПЦР.

Слайд 17

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!