ИНСТРУКЦИОННАЯ КАРТА ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ ПО ПРЕДМЕТУ «АНАТОМИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ» НА ТЕМУ: ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ.
Предварительный просмотр:
ИНСТРУКЦИОННАЯ КАРТА
для практического занятия по предмету
«Анатомия и физиология с/х животных»
Тема: Исследование крови.
Оборудование и наглядные пособия.
1. Исследуемая кровь.
2. Микроскопы.
3. Гемометр Сали.
4. Лейкоцитарный смеситель.
5. Эритроцитарный смеситель
6. Счётная камера Горяева.
7. Глазные пипетки.
8. Смывная чашка.
9. О,1 Н р – р НСl.
10. 2% р – р уксусной кислоты.
11. 3% р – р NaCl.
12. Спирт- эфир.
13. Вата.
14. Марлевые салфетки.
Порядок выполнения задания.
Задание № 1. Определение гемоглобина в крови.
1. Глазной пипеткой налить в градуированную пробирку до нижней метки
О,1 р – р HCl.
2. Набрать в капиллярную пипетку до круглой черты 0,02мл. исследуемую кровь
и осторожно выдуть на дно пробирки, промыть внутреннюю поверхность
пипетки 2 – 3 раза раствором HCl. Из градуированной пробирки, выдувая
каждый раз обратно.
3. Лёгким постукиванием пальца смешать содержимое градуированной пробирки
и выждать 5 мин – пока содержимое примет бурый цвет и станет прозрачным.
4. Сравнить цвет содержимого градуированной пробирки с цветом стандартных
пробирок.
5. Добавлять в градуированную пробирку небольшими порциями, с помощью
глазной пипетки дистиллированную воду, до точного совпадения по цвету
содержимого её со стандартными пробирками. После каждого добавления
дистиллированной воды содержимое смешать стеклянной палочкой, тщательно
стряхивая её перед извлечением. Определить количество гемоглобина
граммпроцентах по нижнему мениксу жидкости в градуированной пробирке с
точностью до 0,1.
Задание № 2. Подсчёт эритроцитов.
1. Подготовить счётную камеру, покровное стекло и смеситель (вымыть в чистой
воде, вытереть на сухо марлевой салфеткой и обезжирить спирт – эфиром).
2. Притереть покровное стекло к крайним колонкам счётной камеры до появления
радужных колец.
3. В подготовленный смеситель набрать исследуемую кровь точно до метки 0,5
при разбавлении в 200 раз или до метки 1,0 при разбавлении в 100 раз, а затем
набрать 3% р – р NaCl до метки 101.
4. Энергическими движениями в течении 2 мин, смешать содержимое в
смесители и удалить в вату 4 – 5 капель, а пятую или шестую из смесителя
поместить на среднюю колонку счётной камеры под покровное стекло.
5. Выждать 5 мин. и приступить к подсчёту эритроцитов под микроскопом
разделённых на 16 маленьких квадратов каждый. Большие квадраты брать по
диагонали сетки или четыре по углам, а пятый в центре сетки.
6. Подсчёт проводить по маленьким квадратикам и считать все эритроциты,
свободно лежащие в квадратах и находящиеся на верхней и левой пограничных
линиях.
7. Найти сумму эритроцитов во всех пяти квадратах и провести окончательный
расчёт по форме:
где: п – кол – во эритроцитов в подсчитанных
в 80 малых квадратах;
С п х 4000 х а ; 4000 – объём малого квадрата;
в а – степень разведения крови;
в – число малых квадратов, в которых
подсчитывались эритроциты.
8. Вымыть, высушить и обезжирить камеру, покровное стекло, эритроцитарный
смеситель.
Задание № 3. Подсчёт лейкоцитов в исследуемой крови.
1. Подготовить счётную камеру, покровное стекло, лейкоцитарный смеситель
(вымыть в чистой воде, насухо вытереть марлевой салфеткой и обезжирить
спирт – эфиром).
2. Притереть покровное стекло к крайним колонкам камеры до появления
радужных колец.
3. В подготовленный смеситель набрать исследуемую кровь точно до метки
0,5 (при разбавлении в 20 раз) или до метки 1,0 при разбавлении в 10 раз, а
затем набрать 2% р – р уксусной кислоты до метки 11.
4. Энергичными движениями в течении 2 мин. Содержимое в смесителе смешать
и удалить из него в вату две капли, третью каплю из смесителя поместить на
среднюю колонку под покровное стекло.
5. Выждать 5 мин. и приступить к подсчёту лейкоцитов под микроскопом.
Подсчёт лейкоцитов проводить поочерёдно в 100 больших квадратах (белых)
счётной камеры, сгруппированных по четыре, считать все лейкоциты свободно
лежащие в больших квадратах и находящиеся на верхней и левой пограничных
линиях.
6. Вычислить сумму лейкоцитов во всех 100 больших квадратах и провести окончательный расчёт по форме:
С п 250 а ; где: п – число лейкоцитов в 25
в больших квадратах;
250- объём большого квадрата;
а – степень разведения крови;
в – число больших квадратов,
в которых подсчитывались
лейкоциты.
7. Вымыть, высушить и обезжирить покровное стекло, и смеситель.
Задание на дом: Описать в дневнике порядок выполнения и результат работы.
Материал подготовил:
преподаватель ветеринарных дисциплин В.Н. Никишов.